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生化分析儀的單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)具體指的是什么?

更新時(shí)間:2020-03-23      點(diǎn)擊次數(shù):5033
      在生化分析儀的使用說(shuō)明中我們發(fā)現(xiàn)有這樣兩個(gè)概念,即單波長(zhǎng)、雙波長(zhǎng),但對(duì)于很多新手來(lái)說(shuō),對(duì)此并不了解,下面我們來(lái)仔細(xì)說(shuō)說(shuō)。
  生化分析儀采用一個(gè)波長(zhǎng)檢測(cè)物質(zhì)的光吸收強(qiáng)度的方式稱為單波長(zhǎng)方式。當(dāng)反應(yīng)液中含有一種組分,或在混合反應(yīng)液中待測(cè)組分的吸收峰與其它共存物質(zhì)的吸收波長(zhǎng)無(wú)重疊時(shí),可以選用。
  在吸光度檢測(cè)中,使用一個(gè)主波長(zhǎng)和一個(gè)次波長(zhǎng)的稱雙波長(zhǎng)方式。當(dāng)反應(yīng)液中存在干擾物的較大吸收、從而影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性時(shí),采用雙波長(zhǎng)方式更好。
  雙波長(zhǎng)的作用:雙波長(zhǎng)(di-wavelength)測(cè)定優(yōu)點(diǎn)是①消除噪音干擾;②減少雜散光影響;③減少樣品本身光吸收的干擾。從光源,到比色杯、單色器、檢測(cè)器的整個(gè)光路系統(tǒng)中,均存在著隨時(shí)間發(fā)生變化的不穩(wěn)定的檢測(cè)信號(hào),即噪音,而雙波長(zhǎng)檢測(cè)是同時(shí)進(jìn)行的,兩種波長(zhǎng)檢測(cè)產(chǎn)生的噪音基本上相同,因而能消除噪音干擾。當(dāng)樣品中存在非化學(xué)反應(yīng)的干擾物如甘油三酯、血紅蛋白、膽紅素等時(shí),會(huì)產(chǎn)生非特異性的光吸收,而干擾測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。采用雙波長(zhǎng)方式測(cè)定可以部分消除這類干擾,提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
  次波長(zhǎng)的確定方法:當(dāng)被測(cè)物的主波長(zhǎng)確定之后,再選擇次波長(zhǎng)。如根據(jù)甘油三酯等干擾物吸收光譜特征,選擇次波長(zhǎng),使干擾物在主、次波長(zhǎng)處有盡可能相同的光吸收值,而被測(cè)物在主、次波長(zhǎng)處的光吸收值應(yīng)有較大的差異。一般來(lái)說(shuō),次波長(zhǎng)應(yīng)大于主波長(zhǎng)100nm。以主波長(zhǎng)與次波長(zhǎng)吸光度差來(lái)計(jì)算結(jié)果。
  雙波長(zhǎng)的具體應(yīng)用:對(duì)于某些反應(yīng)速度快且無(wú)法設(shè)置為兩點(diǎn)終點(diǎn)法的分析項(xiàng)目,尤其是單試劑分析中,可以利用雙波長(zhǎng)的方式來(lái)部分消除樣品本身的光吸收干擾。目前用單試劑法測(cè)定的項(xiàng)目應(yīng)用雙波長(zhǎng)的為血清總蛋白(雙縮脲法)主波長(zhǎng)500nm,次波長(zhǎng)576nm;血清白蛋白(溴甲酚氯法)主、次波長(zhǎng)分別為600和700nm;鈣(偶氮砷Ⅲ法)主、次波長(zhǎng)分別為660、770nm;磷(紫外比色法)主、次波長(zhǎng)為340、405nm,鎂(二甲苯胺藍(lán)法)主、次波長(zhǎng)為505和600nm。

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